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牛肉片中(飼料)的粗蛋白含量檢測方案

一．原理
凱氏法測定樣品中的含氮量，即在催化劑作用下，用硫酸破壞有機物，使含氮物轉化成硫酸銨。加入強堿進行蒸餾使氨逸出，用硼酸吸收后，再用酸滴定，測出氮含量，將結果乘以換算系數6.25，計算出粗蛋白含量。
二．試劑
1) 硫酸：化學純，含量為98%，無氮。
2) 混合催化劑：1g硫酸銅，9g硫酸鉀，均為化學純，磨碎混勻。
3) 氫氧化鈉：化學純，40%水溶液（m/v）。5%水溶液（m/v）
4) 硼酸：化學純，2%水溶液（m/v）。
5) 混合指示劑：甲基紅0.1%乙醇溶液，溴甲酚綠0.5%乙醇溶液，兩溶液等體積混合，在陰涼處保存期為三個月。
6) 鹽酸標準溶液：c(HC1)=0.1mol/L。9ml鹽酸（分析純），注入1000ml蒸餾水中。
7) 硼酸吸收液：2%硼酸溶液（20 g/L）：稱取100 g 硼酸，加水溶解后并稀釋至5000 mL。加入（1：3.5混合指示劑6ML）搖勻，再加入5%的氫氧化鈉稀釋溶液0.35ML搖勻，顏色呈紫紅色。
三．儀器設備
1) 實驗室用樣品粉碎劑或研缽
2) 分析天平：感量0.0001g
3) 消化爐（SKD-20S2）
4) 容量瓶100ml
5) 滴定管：10、25ml
6) 消化管：300ml
7) 定氮儀(SKD-1000)
四．分析步驟
1 樣品的消化
稱取樣品0.5~1g(含氮量5~80mg)準確至0.0002g，放入消化管中，加入5g混合催化劑，與樣品混合均勻，再加入10ml硫酸，將消化管置于消化爐上加熱，直至呈透明的藍綠色，然后在繼續加熱，至少30分鐘。
2 SKD-20S2消化爐
操作（6個樣品和2個空白）
按”SET”鍵+“A/M”鍵3秒，跳出**設置區程序參數修改界面。連續按“SET”鍵數次出來
檢查“RUN”=“3”，pro= “ 1 ” ，再設置r1 =200，T1=5分鐘，c1=180度，r2=180，T2=10,C2=250度，r3=180， T3=5, C3=350度，r4=200，T4=90，c4=410，r5=0，T5=0,C5=0度。。。。r32=0,t32=0,c32=0,設置好后等幾秒鐘，程序會自動保存。

再打開啟動開關（綠開關）-----------程序自動運行，自動結束。如果出現不運行，再檢查“RUN”設置為“3”，pro= “ 1 ” 。

3 SKD-1000全自動定氮儀
樣品消化好后，冷卻至室溫。
蒸餾設置：堿45ml，稀釋液40ml，標準酸0.0911（mo/l），蒸餾功率一百%，蒸餾時間6分鐘，硼酸儀器自動加。

氮含量計算公式

重復性計算公式

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